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Q&A环节
 

1. 怎样购买份量合适数量的慢病毒颗粒？

先估算：文献找到 MOI 参考值。带入公式计算。

后续仍需要做预实验找出最佳 MOI。
另外：全套慢病毒颗粒包括：目的基因的慢病毒颗粒和对照慢病毒颗粒。若不熟悉操作，可以先用对照来练手。
 

2. 慢病毒颗粒感染效率很低，what now ？

我们先保证细胞生长状态良好。然后适当提高 MOI 值。还也可以在培养基中加入 Polybrene (4-10 µg/mL) 提高感染效率。
 

3. 添加慢病毒颗粒后，细胞为什么大量死亡 ?

慢病毒颗粒对靶细胞有一定毒性。添加量过多、感染时间过长都可能对目的细胞 造成伤害。另外：还有可能是表达的目的基因本身引起的细胞死亡。现在你可以试试降低 MOI 值，并在感染细胞 4-8 小时后进行更换新培养液。
 

4. 对照慢病毒的 eGFP 的荧光很强，但是目的基因的荧光很弱，为什么 ?

这个原因有很多。如果目的基因慢病毒和对照的滴度不一样；如果两者感染效率不一样；又或者若是融合表达的目的基因和荧光标签，那两者可能发生相互作用影响表达。
 
补充：一般在易感染的细胞中 72 小时后才能达到 eGFP 的表达高峰。另外，eGFP 荧光强弱不能代表目的基因表达多少。若 eGFP 和目的基因非融合表达，两者不相关； 即使两者共表达， 也需要做 qPCR 或 Western Blot 进一步检测确定。
 

5. 进行慢病毒颗粒感染后，用 qPCR 检测不到目的基因表达量的变化？

建议同时培养、感染目的细胞和 293T 工具细胞，同时进行检测，如目的基因在 293T 细胞转录不受影响，则可能是细胞本身的特性限制目的基因表达。
 

6. 储存的慢病毒颗粒染菌了，怎么办？

可以使用 0.45 µm 滤膜虑菌。当然，你的慢病毒会损失一部分。如条件允许，还是重新购买比较好。
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